Оценка влияния микробиологических препаратов на тлей и их энтомофага - хищную галлицу Aphidoletes aphidimyza Rond

p align="left">Показано, что компоненты комплекса, ответственные за инсектицидную активность, по химическому составу относятся к пептидолактонам треонинового типа. Работа по их идентификации продолжается.

Из П-56 выделен клон П-56-1, с отличным от исходного комплексом метаболитов, действие которого на насекомых еще изучается.

2. Streptomyces herbaricolor S-100 изолирован при микробиологическом обследовании дерново-подзолистых почв Западной Сибири вблизи г. Тюмени в 1989 году. Данные препараты находятся на стадии разработки.

Из S-100 был выделен клон с комплексом метаболитов, содержащий красный красящий пигмент. Поэтому далее мы называем его S-100кр.

Нами были проведены следующие эксперименты:

1) Оценка влияния микробиологических препаратов 729, 925, П-56, П-55, S-100 на выживаемость и развитие пятнистой оранжерейной тли;

2) Оценка влияния на выживаемость галлицы афидимизы при обработке препаратами П-56-1 и S-100кр. афидофага на эмбриональной, личиночной и на стадии кокона (сразу после окукливания и спустя некоторое время) инсектицидами микробиологического происхождения на основе штаммов Streptomyces sp. (далее препараты П-56, П-56-1, S-100, S-100кр.), которые были получены в результате скрининга коллекционных, а также свежевыделенных из почв изолятов, в лаборатории микробиологического метода защиты растений №8, ВИЗР.

2.1.2 Методы

Работа по оценке влияния преператов микробиологического происхождения на тлей и галлицу выполнялась в 2005 году в лаборатории биометода №7, ВИЗР под руководством с.н.с. Козловой Е.Г. совместно с лабораторией микробиологического метода защиты растений №8, ВИЗР.

2.1.3 Разведение виковой тли

Бобы выращивают в стеклянных банках (емкостью 0,5 л) с обычной водопроводной водой. Банки закрывают полиэтиленовыми крышками, в которых пробито по 10 отверстий диаметром 5-7 мм. Семена овощных бобов замачивают на 1 день в 0,5%-ном растворе марганцовки. Затем семена размещают ровным слоем на противень со стенками высотой 5-6 см, засыпают смесью древесных опилок и стружки и ставят на стеллаж. После появления семядольных листьев растения высаживают в отверстия крышки, сохраняя одно незанятым для полива, банки ставят на тот же стеллаж и заселяют бобы виковой тлей, раскладывая кусочки листьев с тлей (Бондаренко Н.В., Воронова О.В., 1989). Разведение пятнистой оранжерейной тли осуществляли таким же образом, как и виковой.

2.1.4 Разведение галлицы

Разведение галлицы проводили по методике Бондаренко Н.В., Асякина Б.П., 1975 г. Для получения яйцекладок галлицы, в садках размером 35Ч35Ч35 см постоянно поддерживали высокую плотность популяции имаго галлиц. Для этого 2 раза в неделю в садки помещали коконы (1-2 тысячи). Затем в каждую секцию на 1 день помещали 2-3 банки с бобами, заселенными виковой тлей. Кроме того, в садки помещали чашки Петри с кусочком поролона, поставленные в каждую секцию садка, наливали 10 %-ный сахарный сироп.

Вынутые из садка банки с растениями, на которых отложены яйца галлиц, переносили на стеллаж на 3 дня до полного отрождения личинок. Отрождающиеся личинки питались тлями, находящимися на растениях.

Потом просеянный и обеззараженный влажный песок насыпали на дно кристаллизатора слоем 1 см. Срезали с трех-шести банок растения (в зависимости от численности личинок) и выкладывали на поверхность песка. Затем накрывали рамкой затянутой капроновой тканью, чтобы тли не расползались. Ежедневно, в течение семи последующих суток в кристаллизатор добавляли для питания личинок растения с тлями. Через 5 суток после окукливания, точнее ухода личинок в песок, с его поверхности удаляли все остатки растений, а затем отделяли коконы. Для этого просеивали песок с коконами через сито (с отверстиями 1 мм).

2.1.4.1 Оценка влияния микробиологических препаратов на пятнистую оранжерейную тлю в лабораторных условиях

Препараты применялись в концентрации 0,1%, 0,2%. Обработку проводили ручным лабораторным пульверизатором. Каждый вариант опыта закладывали в 5 повторностях. В опыте мы использовали пластиковые контейнеры, которые накрывали тканью с отверстием посередине и сажали в него росток боба и кисточкой подсаживали тлю. На каждом растении находилось в среднем по 9-10 личинок тли старшего возраста. Контролем служили тли, обработанные водой (влажный контроль). Обрабатывали ростки бобов с тлей и ламповое стекло, которым накрывали ростки. После обработки ламповое стекло накрывали двойным слоем марли. Подсчет тли проводили через день, подсчитывая число тли в каждом варианте. В таблицу вносили данные в % по отношению к первому дню, в который проводили обработку, т.е. число тли в первый день принимали за 100% во всех вариантах, а в последующие дни учета численность тли сравнивали с первым днем и вычисляли по формуле: , где Х - % выживших тлей по отношению к первоначальному числу тли; А - число тли на день учета, шт.; В - общее число обработанной тли каждого варианта, шт. Обработку проводили в фазу личинок 3 возраста тли. Также вычисляли скорость нарастания популяции тли по формуле: , где InA - численность тли в день А, InB - численность тли в день В, n - количество дней.

Оценка влияния микробиологических препаратов на пятнистую оранжерейную тлю проводилась в лаборатории биологического метода защиты растений №7, ВИЗР.

2.1.4.2 Оценка влияния препаратов S-100кр. и П-56-1 на галлицу Aphidoletes aphidimyza Rond

Препараты применяли в опытах в концентрациях, которые предполагается использовать в производственных условиях защищенного грунта, в борьбе с тлями. Это позволило в лабораторных условиях создавать токсический фон, адекватный фону для оценки выживания галлиц, после обработки препаратами в защищенном грунте. Обработки разных стадий развития насекомого проводили ручным лабораторным пульверизатором.

Образцы препаратов, приготовленные на основе Streptomyces sp. П-56-1 и S-100кр. (далее препараты П-56-1, S-100кр.) по параметрам острой токсичности, относятся к веществам III класса опасности.

Оценка влияния препаратов П-56-1 и S-100кр. на Aphidoletes aphidimyza Rond. проводилась в лаборатории биологического метода защиты растений №7, ВИЗР. Обработку проводили на фазах: яйцо, личинки 2 возраста, имаго и куколки галлицы.

Обработка яйцекладок

Суточные яйцекладки галлицы помещали на ростки бобов, заселенные виковой тлей, растущие в круглых контейнерах диаметром 10 см. Затем ростки с яйцекладками накрывали ламповым стеклом, предварительно обработав ламповое стекло и яйцекладки на растениях препаратами. В варианте с каждым препаратом П-56 и S-100 было 5 повторностей. Контроль был обработан чистой водой - 5 повторностей.

После обработки ламповое стекло закрывали двойным слоем марли. Выживаемость яйцекладок оценивали по вылету имаго. Для этого выкармливали отродившихся личинок, ежедневно подсыпая в контейнеры виковую тлю. Подсчет имаго во время лета проводили ежедневно.

Обработка личинок галлицы

Личинок 2 возраста помещали тонкой кисточкой на ростки бобов, заселенных виковой тлей, в пластиковые контейнеры. Контейнеры закрывали ламповым стеклом. Предварительно обработав личинок и ламповое стекло препаратами также как в эксперименте с яйцекладками. Ламповое стекло закрывали двойным слоем марли. Личинок выкармливали до имаго, подсыпая ежедневно до окукливания виковую тлю. Учет численности насекомых проводили по вылету имаго.

Обработка коконов галлицы

Коконы галлицы помещали в пластиковые чашки Петри, на дно которых клали фильтровальную бумагу - по 60 штук в опыте и в контроле. В опыте использовали свежие коконы, только что окуклившиеся личинки, и коконы после хранения в холодильнике в течение 10 дней, где куколка уже образовалась. Проводили обработку препаратами П-56-1 и S-100кр. в двух повторностях на свежих и старых коконах, в контроле одна повторность.

Обработка имаго галлицы

В этом эксперименте сначала обрабатывали контейнеры с тлей и ламповое стекло. Имаго выпускали после того, как влага испарится (т.к. имаго галлицы очень чувствительны к капельной жидкости).

Затем имаго (6 особей), при помощи эксгаустера помещали в пластиковые контейнеры с бобами заселенные тлей, заранее обработанные. Учитывали смертность каждый день, после обработки до полной гибели имаго. Затем рассчитывали среднюю продолжительность жизни имаго в каждом варианте. Также оценивали плодовитость имаго.

Долю погибших после обработки особей галлицы определяли по формуле: , где N - общее число обработанных особей, В - число погибших особей. Ошибку вычисляли по формуле: , где р - доля погибших после обработки особей галлицы, в %, N - общее число обработанных особей, шт.

Для статистического анализа использовали T-критерий Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1973; Доспехов Б.А., 1979).

3. Результаты и обсуждение

3.1 Оценка влияния микробиологических препаратов на выживаемость и развитие пятнистой оранжерейной тли

В данном эксперименте мы наблюдаем небольшое снижение численности тли только в вариантах с препаратами S-100, П-56 (табл. 1). Наибольшую биологическую эффективность наблюдаем в варианте с препаратом S-100, которая составляет 34,1%. В варианте с препаратом П-56 она составляет 15%. Остальные варианты практически не отличаются от контроля (табл.1). В дальнейшем (на 5 и 8 день учета) мы наблюдаем, рост популяции пятнистой оранжерейной тли во всех вариантах. Однако скорость нарастания в варианте с S-100 несколько ниже (R=0.32) по сравнению с контролем (R=0.33). В то же время скорость нарастания популяции в вариантах с препаратами 729, П-55 и 925 выше, чем в контроле R=0.39; 0,34; 0,33 соответственно. Это может означать, что биологически активные вещества актиномицетов влияют на репродуктивный потенциал тли и в сторону увеличения и в сторону уменьшения. Исходя из результатов опыта, мы выбрали для дальнейших испытаний два препарата: S-100 и П-56.

Таблица 1

Изменение численности пятнистой оранжерейной тли после обработки микробиологическими препаратами с концентрацией 0,1%

Вариант опыта	Численность пятнистой оранжерейной тли по отношению к первому учетному дню,%
	1 день	2 день	5 день	8 день
контроль	100	106.2±3,2	301.5±17,7	1110.9±39,7
S-100	100	65.9±6,9	200±10,3	623±33,3
729	100	94.2±4,0	337.1±26,0	1474.2±39,2
П-55	100	105±2,9	325.4±19,5	823.7±35,0
П-56	100	85±6,2	312.5±23,0	852.5±43,3
952	100	101.8±1,8	356.6±22,0	981.1±40,7

В эксперименте №2 с препаратами S-100 и П-56 мы взяли более высокую концентрацию 0,2, так как 0,1% концентрация оказалась малоэффективной. Однако и во втором эксперименте мы видим, что снижение численности тли на второй день небольшая: у S-100 до 68,6%, а у П-56 до 79,1% (табл.2). В следующие дни учета также как в опыте 1 наблюдается рост численности тли. Оценивая скорость роста популяции тли, приходим к выводу, что по сравнению с контролем ни один препарат не дал какого-либо снижения этого показателя. Исходя из данных таблицы, можно видеть снижение численности тли в варианте с S-100, по сравнению с контролем разница существенна. Снижение численности в варианте при применении П-56 также существенно отличается от контроля (tФ?tТ0,05;0,01). На 4, 5 и 7 день численность тли возросла во всех вариантах. Следовательно, П-56 и S-100 проявляют токсическое слабое действие и на непродолжительный период времени.

Таблица 2

Изменение численности пятнистой оранжерейной тли после обработки П-56 и S-100кр. в концентрации 0,2%

Вариант опыта	Численность пятнистой оранжерейной тли по отношению к 1 учетному дню, %
	1 день	2 день	4 день	5 день	7 день
контроль	100	112,3 ± 5,3	285,4 ± 31,0	385,5 ± 44,7	958,5 ± 122,3
S-100	100	68,6 ± 6,7	262,5 ± 32,6	350 ± 46,7	750 ± 110,4
П-56	100	79,1 ± 5,9	194,7 ± 22,0	271,1 ± 34,9	734,2 ± 110,7

3.2 Оценка влияния препаратов П-56-1 и S-100кр. на выживаемость и развитие пятнистой оранжерейной тли

Поскольку при повышении концентрации препаратов эффективность практически не изменилась, в лаборатории микробиологии №8 был проведен скрининг и получены активные клоны. На основе S-100 выделили клон имеющем в комплексе метаболитов красный пигмент и названный S-100кр. На основе П-56 выделили новый клон П-56-1. В данном эксперименте мы испытали эти клоны на пятнистой оранжерейной тле в концентрации 0,2%. Исходя из данных таблицы 3 наиболее сильно снижение численности на 2 день в варианте с S-100кр. как по сравнению с контролем так и по сравнению с П-56-1.К 5 дню произошло снижение численности тли на 92% в варианте с S-100кр. и на 68% в варианте с П-56-1 (tФ?tТ0,05;0,01). Таким образом препарат S-100кр. оказался наиболее эффективным, развитие популяции тли значительно замедлялось и сокращалось число живых особей.

Поскольку клоны S-100кр. и П-56-1 проявили хорошую эффективность по отношению к тле, мы использовали их в опытах на галлице, для выявления их токсичности и возможности совместного применения данных препаратов и галлицы в системе защиты от тлей.

Таблица 3

Изменение численности пятнистой оранжерейной тли после обработки препаратами S-100кр и П-56-1 в концентрации 0,2%

Вариант опыта	Численность пятнистой оранжерейной тли по отношению к 1 учетному дню, %
контроль	1 день	2 день	3 день	5 день
	100	98±2,0	94±3,3	178±16,6
S -100кр.	100	36±6,8	12±4,6	8±3,8
П-56-1	100	60±6,9	52±7,0	32±6,6

3.3 Оценка влияния препаратов П-56 и S-100кр. на выживаемость галлицы Aphidoletes aphidimyza Rond. на эмбриональной стадии развития

При обработке яиц различия по выживаемости между препаратами и контролем не существенны. В вариантах с обработкой препаратами П-56-1 и S-100кр. наблюдается более активный вылет имаго по сравнению с контролем.

Следовательно, препараты не оказывают влияния на выживаемость галлицы на стадии эмбрионального развития.

Таблица 4

Выживаемость галлицы Aphidoletes aphidimyza Rond. после обработки препаратами П-56-1 и S-100кр. на стадии яйца в концентрации 0,2%

Вариант опыта	Число яиц, ос.	Число, вылетевших имаго из яиц, ос.	Выживаемость имаго по вылету, %
Контроль	111	42	37,8±4,25
S-100кр.	83	41	49,4±5,49
П-56-1	130	55	42,3±4,69

3.4 Оценка влияния препаратов П-56-1и S-100кр. на выживаемость Aphidoletes aphidimyza на личиночной стадии развития

Из таблицы 3 видно, что при обработке личинок второго возраста различия по выживаемости между препаратами и контролем не существенны. Вылет имаго приблизительно одинаковый во всех вариантах, в контроле даже немного ниже (52%), чем в варианте с S-100кр. (56%), но такой же, как и в П-56-1 (52%) (табл.5).

Следовательно, препараты не оказывают влияния на личинок галлицы.

Таблица 5

Выживаемость галлицы Aphidoletes aphidimyza после обработки препаратами П-56 и S-100 на стадии личинок 2 возраста

Вариант опыта	Число личинок, шт. на одну повторность	Число, вылетевших имаго, особей, в среднем на повторность	Выживаемость имаго по вылету, %
Контроль	10	5,2 ± 1,58	52,00 ± 7,06
S-100кр.	10	5,6 ± 1,57	56,00 ± 7,02
П-56-1	10	5,2 ± 1,58	52,00 ± 7,06

3.5 Оценка влияния П-56 и S-100кр. на выживаемость галлицы Aphidoletes aphidimyza Rond. на стадии образования куколки

При обработке хранившихся коконов выживаемость в варианте с препаратом П-56-1 ниже, чем в контроле (табл. 6). Однако различие между ними не существенно при 5%-ном и 0,01% -ном уровне значимости.

В варианте с препаратом S-100кр. наблюдается более сильное токсическое действие на вылет имаго 56,7%.. Разность между контролем и S-100кр. существенна при 0,05% уровне значимости. Таким образом, S-100кр. влияет на вылет имаго из коконов после хранения (tФ ? tТ).

Таблица 6

0Вариант опыта	Число коконов после хранения, особей на одну повторность	Число, вылетевших имаго, особей, в среднем на повторность	Выживаемость имаго по вылету, %
Контроль	60	55,00 ±	91,6 ± 3,58
S-100кр.	30	17,00 ±	56,7 ± 9,04
П-56-1	30	23,50 ±	78,3 ± 7,53

При обработке свежих коконов вылет имаго в варианте S-100кр не сильно отличается от вылета имаго в контроле. Разность между вариантами не существенна при 0,05 и 0,01%-ном уровне значимости. В тоже время вариант с препаратом П-56-1 наблюдается менее активный вылет имаго 56%. При сравнении варианта П-56-1 с контролем разница существенна на 0,05% уровне значимости.

Страницы: 1, 2, 3, 4